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    小鼠免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒及检测范围

    发布时间: 2020-03-16  点击次数: 482次

    小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶联免疫分析

    试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供研究使用。

    检测范围:

    96T

    0.1ng/ml - 4ng/ml

    使用目的:

    本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白 M(IgM)含量。

    实验原理

    本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)水平。用纯化的抗原包

    被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白 M(IgM),再与 HRP 标记

    的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB

    HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中

    的免疫球蛋白 M(IgM)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标

    准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白 M(IgM)浓度。

    试剂盒组成

    1

    30 倍浓缩洗涤液

    20ml×1

    7

    终止液

    6ml×1

    2

    酶标试剂

    6ml×1

    8

    标准品(8ng/ml

    0.5ml×1

    3

    酶标包被板

    12 孔×8

    9

    标准品稀释液

    1.5ml×1

    4

    样品稀释液

    6ml×1

    10

    说明书

    1

    5

    显色剂 A

    6ml×1

    11

    封板膜

    2

    6

    显色剂 B

    6ml×1/

    12

    密封袋

    1

    标本要求

    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

    马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

    2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步骤

    1.

    标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行

    稀释。

    4ng/ml

    5 号标准品

    150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

    2ng/ml

    4 号标准品

    150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

    1ng/ml

    3 号标准品

    150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

    0.5ng/ml

    2 号标准品

    150μl 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

    0.25ng/ml

    1 号标准品

    150μl 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

    2.

    加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

    待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底

    部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

    3.

    温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

    4.

    配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

    5.

    洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

    重复 5 次,拍干。

    6.

    加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

    7.

    温育:操作同 3

    8.

    洗涤:操作同 5

    9.

    显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

    10 分钟.

    10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终

    止液后 15 分钟以内进行。

    操作程序总结:

    计算

    以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

    OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出

    标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    注意事项

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

    用完,板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

    控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

    4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD

    值大于标准品孔D一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,

    计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6 个月