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    细说微生物ELISA试剂盒的技术流程以及注意事项

    发布时间: 2020-07-23  点击次数: 46次
      微生物ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。往预先包被微生物捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的微生物呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
     
      产品优势特点如下:
      1、原装进口抗体:高效、灵敏、特异;
      2、规范包被操作:吸附均匀、吸附性好、空白值低、空底透明度高;
      3、的优化方案:回收利用率高、可靠性强;
      4、适用于体液、组织匀浆,细胞培养上清液、尿液等各种类型的样本;
      5、可检测指标齐全:生长因子、炎症因子、脂肪因子、基质金属蛋白酶等等。
     
      微生物ELISA试剂盒技术流程:(双抗体夹心法)
      1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次;
      2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤;
      3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤;
      4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟;
      5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;
      6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

      微生物ELISA试剂盒的注意事项:
      1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
      2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
      3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
      4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
      5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6、底物请避光保存。
      7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
      8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
      9、不同批号组分不得混用。