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    详细分析小鼠ELISA试剂盒的操作进程的控制

    发布时间: 2020-10-28  点击次数: 52次
      小鼠ELISA试剂盒的实验原理:                                     
      将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
     

      实验前的准备工作:
      1、准备好所有实验额外所需物品,如试管 吸头 移液器 离心机等。
      2、确定试剂盒在有效期内。
      3、仔细阅读说明书。
      4、按说明书确定所有试剂齐全(数量 体积)。
      5、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。
      6、根据检测标本数量确定所需试剂的量。
      7、按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂。
     
      小鼠elisa试剂盒操作进程的控制:
      1、严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30~60min。
      2、加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作.按说明进程严峻控制操作时间,避免孵育时间人为延伸,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
      3、封板温育时,各孔一定要封严,避免阳性标本的液体蒸发,发作周边现象然后导致“花板”的出现。
      4、用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,elisa试剂盒洗板针疏通,洗完板后在吸水纸挑选洁净无或少尘的吸水材料上轻轻拍干:还要避免针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的进程中易发作拖带现象而导致“花板”的出现。
      5、合理安排检测量,避免反应板过多构成洗板等候时间长。
      6、加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。
      7、显色剂尽量在临用前制作,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
      8、加样时保持显色剂不外流;AB液应避免触摸金属器械,加停止液时应避免发作气泡。
      9、小鼠ELISA试剂盒应保证C清洁,整个操作进程中保证酶标板不触摸次氯酸,以上的办法可以使“花板”降至至低极限。然后提高检测的特异性,并得到更可靠的实验成果。