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    详细分析牛血清蛋白ELISA试剂盒的操作步骤

    发布时间: 2020-05-26  点击次数: 81次
       牛血清蛋白ELISA试剂盒是一款稳定性强、易保存,操作简便,结果判断较客观的ELISA试剂盒。
     
      牛血清蛋白ELISA试剂盒的准确性:
      温育:加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
      显色:牛血清蛋白ELISA试剂盒一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。用离心收集在真空血液收集管中的血液,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书指定方法检测。建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
     
      牛血清蛋白ELISA试剂盒的操作步骤:
      1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
      2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
      3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
      4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
      5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次。
      6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
      7、温育:重复4的操作。
      8、洗板:重复5的操作。
      9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。
      10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
      11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
      12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。Zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。