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          免疫沉淀(IP)
              在细胞生物学研究中,有时要对细胞膜分子、胞内分子或表达产物进行定性或/和定量。但由于靶蛋白表达水乎不太高,用细胞裂解液或表达上清进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹(Western blot)检测很难达到实验目的。为此可用特异性识别靶蛋白的抗体进行免疫沉淀,纯化和富集靶抗原。免疫沉淀所获得的蛋白可进行SDS-PAGE电泳,经考马氏亮蓝染色或银染后观察目的蛋白条带。如果免疫沉淀得到的目的蛋白量低于考马氏亮蓝染色或银染的检测下限,可采用 Western blot检测方法,提高检测的灵敏度,达到实验目的。
              免疫沉淀是利用抗原蛋白和抗体特异性结合,以及细菌蛋白prorein A/G可特异地结合到抗体的FC片段的原理衍生出来的实验方法。目前多用预先结合了protein A/G的sepharose。免疫沉淀的成功依赖于抗原的纯度以及制备抗原的难易,主要受两方面因素的影响:1抗原原液的丰度;2抗体对抗原的亲和力。有3种类型的抗体可用于免疫沉淀:多克隆抗体,混合单克隆抗体和单克隆抗体。

          服务编号:YKSO-009          

          服务内容:
              1. 样品处理;
              2. 样品、抗体与Protein A/G sepharose孵育;
              3. 抗原、抗体与Protein A/G sepharose复合物洗涤;
              4. 沉淀产物鉴定。

          样品要求:
              1. 待检测样品:可以是直接的待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织或细菌样品,但需收取蛋白抽提费用; 
              2. 免疫沉淀用抗体;
              3. 检测用抗体。

          交付材料:
              检测结果及实验报告。

          *不同种属来源及不同亚类的抗体与蛋白A和蛋白G的-结合力不同(表),有的甚至不能结合,如小鼠的 IgM,这类抗体不能用蛋白 A/G-agarose直接免疫沉淀


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